Scopul: Caracterizarea și analiza cantitativă a compoziției matricei extracelulare (MEC), izolată din artera carotidă porcină prin metoda de decelularizare combinată (DC) modificată. Material și metode: Arterele carotide porcine crioprezervate (trei replici biologice) au fost tratate cu (1) soluție hipotonă, și anume dH2O, timp de 24 de ore, (2) detergenți timp de 48 de ore (expunere la 0,5%[SDS+SDC] timp de 24 de ore, urmată de tratarea cu 1% TritonX-100 timp de 24 de ore) și (3) digestie enzimatică (prelucrare timp de 48 de ore cu 300 U/ml DNază I). Eficacitatea protocolului descris a fost evaluată prin analiza comparativă axată pe aprecierea gradului de conservare structurală și a compoziției matricei decelularizate, anume determinarea cantității de ADN restant, hidroxiprolină și glicozaminoglicani. Datele sunt prezentate ca medie±DS. Rezultate: Cuantificarea a fost realizată prin metoda cu fluorescență. Cantitatea de ADN în vasul nativ (23.56±4.63 μg/mg de greutate uscată, n=18) a fost redusă după decelularizare (1.03±0.49 μg/mg de greutate uscată, n=18; p=0.0001) cu 95,6%. Cuantificarea GAG a evidențiat o scădere semnificativă a conținutului de glicozaminoglicani cu 90% în lotul decelularizat (1.30±0.72 μg/mg de greutate uscată, n=13) vs vasul nativ (13.01±3.56 μg/mg de greutate uscată, n=17; p=0,0001). Conținutul de colagen a crescut relativ cu 28.5% din greutatea uscată după DC (69.70±7.60 μg/mg, n=18) din cauza eliminării proteinelor celulare vs vasul nativ (54.26±10.68 μg/mg de greutate uscată, n=16; p=0,0001). Concluzii: Protocolul aplicat de decelularizare combinată a permis îndepărtarea eficientă a elementelor celulare din scaffold, demonstrată prin reducerea semnificativă a conținutului de ADN cu prezervarea proteinelor din MEC.

The aim of the study: To characterize and quantitatively analyze the extracellular matrix (ECM) isolated from porcine carotid artery by a modified combined decellularization (DC) procedure. Material and methods: Cryopreserved porcine carotid arteries (three biological replicates) were treated with (1) hypotonic solution, namely dH2O, for 24h, (2) detergents for 48h (exposure to 0.5%[SDS + SDC] for 24h, followed by exposure to 1% TritonX-100 for 24h), (3) and enzymatic digestion (48h exposure to 300 U/ml DNase I). The effectiveness of the described protocol was analyzed by performing a comparative analysis – structural preservation and composition being analyzed by quantitative evaluation of remaining DNA, hydroxyproline, and glycosaminoglycans after treatment. Data are presented as mean±SD. Results: The quantification was performed using a fluorescence analysis. The DNA of the non-treated vessel (23.56±4.63 μg/mg of dry weight, n=18) was significantly reduced by 95.6% after decellularization (1.03±0.49 μg/mg of dry weight, n=18; p=0.0001). Quantification of GAG revealed a decrease in GAG content by 90% in all decellularized groups (1.30±0.72 μg/mg of dry weight, n=13) compared to native vessels (13.01±3.56 μg/mg of dry weight, n=17; p=0.0001). The collagen content relatively increased as a percentage by 28.5% of the dry weight after DC (69.70±7.60 μg/mg, n=18) compared with the fresh vessels (54.26±10.68 μg/mg of dry weight, n = 16; p=0.0001) due to the removal of other cellular proteins. Conclusions: The applied DC protocol allowed to remove efficiently the cellular elements from the scaffold, demonstrated by significant reduction of DNA content (95.6%), while the main proteins of ECM are preserved.