Proteazele microbiene sunt folosite pe larg în diverse procese industriale, investigaţii ştiinţifice, farmaceutică, bioremediere etc. Domeniile de aplicare ale preparatelor proteolitice sunt dependente de specificitatea de acţiune a enzimelor şi de gradul de puritate al acestora. În procesele de bioremediere pot fi aplicate preparate enzimatice brute (obţinute prin concentrarea lichidului cultural), pentru obţinerea detergenţilor, prelucrarea pieilor se utilizează preparate parţial purificate (prin salifiere sau precipitare cu solvenţi organici), pe cînd în medicină sau farmaceutică sunt solicitate proteazele cu grad înalt de puritate (prin intermediul tehnicilor de cromatografie de schimb ionic, cromatografie de afinitate, focusare isoelectrică, gel-filtarare). Prin sedimentare cu alcool etilic de 96% a exoproteazelor sintetizate de micromiceta Fusarium gibbosum CNMN FD 12 a fost obţinut un preparat proteolitic,activ în condiţii neutre (pH 7,4) şi acide (pH 3,6) de hidoliză, cu activitate enzimatică de 189,5U/g şi 133,8U/g, respectiv. În scopul majorării gradului de puritate a preparatului enzimatic a fost realizată purificarea acestuia prin gel-filtrare şi cromatografie de schimb ionic. Profilul de purificare al preparatului proteolitic obţinut din F. gibbosum Purificarea proteazelor a determinat creşterea activităţii specifice a preparatului de 25,9 ori în cazul proteazelor neutre (12,905 U/mg proteină) şi de 27,3 ori în cazul proteazelor acide (9,608 U/mg proteină).Randamentul proteazelor neutre a constituit 19%, iar cel al proteazelor acide– 20%. Profilul de eluare a proteinelor prin cromatografia anionică a indicat separarea unei fracţii proteolitic active, atât la valoarea pH-ului acid 3,6, cât şi neutru 7,4. Activitatea proteazelor acide a fost mai slabă de 1,34 ori, fenomen caracteristic proteazelor sintetizate de tulpina F. gibbosum. Astfel, profilul de purificare şi profilul de eluare a proteazelor micromicetei F. gibbosum a demonstrat că enzimele proteolitice reprezintă doar o mică parte a tuturor proteinelor lichidului cultural al tulpinii studiate, iar algoritmul de purificare aplicat prin gel-filtrare şi cromatografie anionică determină o metodă eficientă de obţinere a preparatelor proteolitice înalt active din F. gibbosum. Eluarea proteazelor neutre, cât şi a celor acide într-o singură fracţie poate fi condiţionată de activitatea unui singur tip de proteaze într-un interval foarte larg de pH. Etapa Proteine (mg/ml) Activitatea proteolitică (U/ml) Activitatea specifică (U/mg) Randament (%) Grad de purificare pH 7,4 pH 3,6 pH 7,4 pH 3,6 pH 7,4 pH 3,6 pH 7,4 pH 3,6 Soluţie de preparat sedimentat cu alcool etilic (200mg/3ml) 25,333 12,633 8,920 0,498 0,352 100 1 Extract 4,988 10,173 6,632 2,039 1,329 80,5 74 4,1 3,8 Gel-filtrare (coloana PD-10) 1,821 5,335 4,254 2,930 3,434 42 47,5 5,9 9,8 Cromatografie de schimb ionic (coloană HiTrapTM Q) 0,189 2,439 1,816 12,905 9,608 19 20 25,9 27,3