Procedee de sinteză orientată a enzimelor proteolitice de către tulpina fungică Fusarium gibbosum
Închide
Articolul precedent
Articolul urmator
586 24
Ultima descărcare din IBN:
2024-04-21 13:01
SM ISO690:2012
CLAPCO, Steliana, BIVOL, Cezara, CILOCI (DESEATNIC), Alexandra. Procedee de sinteză orientată a enzimelor proteolitice de către tulpina fungică Fusarium gibbosum. In: Integrare prin cercetare şi inovare.: Ştiinţe naturale, exacte şi inginereşti , 26-28 septembrie 2013, Chișinău. Chisinau, Republica Moldova: Universitatea de Stat din Moldova, 2013, R, SNEI, pp. 54-57.
EXPORT metadate:
Google Scholar
Crossref
CERIF

DataCite
Dublin Core
Integrare prin cercetare şi inovare.
R, SNEI, 2013
Conferința "Integrare prin cercetare şi inovare"
Chișinău, Moldova, 26-28 septembrie 2013

Procedee de sinteză orientată a enzimelor proteolitice de către tulpina fungică Fusarium gibbosum


Pag. 54-57

Clapco Steliana, Bivol Cezara, Ciloci (Deseatnic) Alexandra
 
Institutul de Microbiologie şi Biotehnologie al AŞM
 
 
Disponibil în IBN: 1 iunie 2020


Rezumat

Proteazele reprezintă un grup complex de enzime, cu multiple implicări practice în diverse domenii ale economiei naţionale, aşa ca industria alimentară (producerea brânzeturilor, panificaţie, obţinerea hidrolizatelor din soia, frăgezirea cărnii etc.), oenologie, agricultură (aditivi alimentari în nutreţurile animalelor), industria uşoară (prelucrarea pieilor), medicină etc.  Surse avantajoase de proteaze sunt fungii microscopici, caracterizaţi prin capacitatea de a creşte pe medii ieftine în bază de subproduse ale industriei alimentare şi de a produce în cantităţi semnificative o gamă largă de proteaze exocelulare (acide, neutre, alcaline), uşor recuperabile din lichidul cultural prin tehnici simple şi accesibile. Obţinerea pe cale biotehnologică a preparatelor enzimatice presupune exploatarea la maxim a potenţialului biosintetic al microorganismului producător. În acest context, factori eficienţi de dirijare a proceselor biosintetice, care asigură atât sporirea activităţii enzimatice, precum şi reducerea duratei ciclului tehnologic, sunt recunoscuţi compuşii coordinativi ai metalelor de tranziţie [1- 3].  Cercetările reflectate în lucrarea prezentă au avut drept obiectiv elaborarea unor procedee de sinteză orientată a proteazelor microbiene, ce vizează implicarea micromicetei Fusarium gibbosum CNMN FD 12 – producătoare de proteaze şi unele combinaţii complexe ale Co (III) în bază de liganzi oximici în calitate de reglatori. Tulpina producătoare a fost cultivată submers, la temperatura de 28-300C, în condiţii de agitare continuă, în baloane Erlenmeyer cu capacitatea de 0,5 l, ce conţineau 0,1 l mediu nutritiv, cu următoarea compoziţie, g/l: făină de porumb – 20,0; făină de soia – 10,0; CaCO3 – 2,0; (NH4)2SO4 – 1,0; pH – 6,25. A fost studiată influenţa compuşilor coordinativi ai Co cu liganzi oximici: [Co(DH)2(An)2][PF6]; [Co(NioxH)2(Thio)2][PF6]; [Co(DH)2(Seu)7/4(SeSeu)1/4]2[TiF6]·H2O. Metalocomplecşii au fost adiţionaţi la mediul de cultivare în limita de concentraţii 1,0-20,0 mg/l. Investigaţiile au fost realizate în dinamică, pe parcursul a 3 zile de cultivare (a 4-6-a zi). Activitatea proteazelor exocelulare acide (pH 3,6) şi neutre (pH 7,4) a fost determinată în conformitate cu metoda Willstatter, bazată pe hidroliza gelatinei până la aminoacizi şi polipeptide cu determinarea ulterioară a grupelor carboxilice libere [4]. S-a constatat efectul pozitiv al compuşilor coordinativi incluşi în studiu asupra activităţii proteazelor acide şi neutre a micromicetei Fusarium gibbosum CNMN FD 12, sporul activităţii (50-90%) variind în funcţie de concentraţia administrată. Valorile maxime ale activităţii proteolitice au fost înregistrate, cu precădere, la aplicarea compuşilor în concentraţii de 5-10 mg/l.  În probele cultivate în prezenţa compuşilor coordinativi, maximul activităţii proteolitice se manifestă în a 5-a zi de cultivare, analog probei martor. De remarcat însă că, în a 4-a zi de cultivare activitatea proteazelor neutre a probelor cultivate în prezenţa compuşilor coordinativi, în concentraţii de 5 mg/l, este echivalentă martorului din ziua a 5-a. Efectul menţionat are un impact pozitiv esenţial asupra producerii, asigurând obţinerea preparatelor enzimatice cu conţinut sporit de proteaze neutre într-o perioadă de timp mai redusă, cu cheltuieli energetice mai scăzute şi, respectiv, la un preţ de cost diminuat. Datele obţinute au servit ca bază în elaborarea unor procedee de sinteză orientată, conform schemei expuse.Procedeele de cultivare a micromicetei în prezenţa compuşilor coordinativi pot fi aplicate în funcţie de scop: I – obţinerea preparatelor enzimatice proteolitice, cu activitate înaltă şi componenţă balansată de proteaze acide şi neutre; II – obţinerea preparatelor enzimatice proteolitice, cu activitate înaltă, îmbogăţite cu proteaze neutre în intervale reduse de timp. Conform schemei prezentate, compuşii coordinativi cu efect similar au fost grupaţi într-un procedeu unic, servind ca alternativă. Astfel, fiecare dintre procedeele propuse se prezintă în câteva variante, selectate ca optime: Procedeul I: Tulpina Fusarium gibbosum CNMN FD 12 se cultivă timp de 5 zile pe mediul nutritiv de bază, la care suplimentar se adiţionează compuşii coordinativi, după cum urmează:  a) compusul coordinativ Co(NioxH)2(Thio)2][PF6], în concentraţie de 5,0 mg/l sau b) compusul coordinativ [Co(DH)2(Seu)7/4(Se-Seu)1/4]2[TiF6]·H2O în concentraţie de 10,0 mg/l. Avantaj: sporul activităţii proteazelor acide cu cca 60-70%; proteazelor neutre – 70-85%. Procedeul II: Tulpina Fusarium gibbosum CNMN FD 12 se cultivă timp de 4 zile pe mediul nutritiv de bază, la care suplimentar se adiţionează compuşii coordinativi, după cum urmează: a) compusul coordinativ Co(NioxH)2(Thio)2][PF6], în concentraţie de 5,0 mg/l sau b) compusul coordinativ [Co(DH)2(Seu)7/4(Se-Seu)1/4]2[TiF6]·H2O în concentraţie de 5,0 mg/l. Avantaj: activitatea proteazelor neutre în ziua a 4-a de cultivare, echivalentă martorului din ziua a 5-a. Procedeele elaborate se recomandă pentru cultivarea micromicetei producătoare în scopul producerii preparatelor proteolitice autohtone competitive, la preţ accesibil.