Микроглия является единственным в центральной нервной системе представительством
иммунокомпетентных клеток, способных защитить мозг от повреждающих факторов, в том числе,
возникающих при ишемическом повреждении. Одним из рецепторов мембраны микроглии является общая
рецепторная субъединица (β-cR), которая при наличии лиганда может быть включена в димерный комплекс
с эритропоэтином. В качестве агониста к этому рецептору использовали карбамилированный дарбэпоэтин
(CdЕPO) (ООО ФАРМАПАРК, Москва), исследования которого показали его нейропротекторные свойства.
Целью данной работы было изучение соотношения фенотипов микроглии после окклюзии средней
мозговой артерии (ОСМА) при введении CdЕPO. Часовую ОСМА мышей линии C57BL/6 моделировали под
общим изофлюрановым наркозом с использованием микрофиламента 7-0 (Doccol Corporation). CdЕPO
водили внутривенно через 1,3,6,12,24,48 после ОСМА в дозе 50 мкг/кг. Сохранность базовой активности и
памяти исследовали на 10 сутки после операции с помощью теста Open Field LE800S и установки Shuttle
Box LE916 (PanLab/Harvard Apparatus). Количество животных в группе– 10. Микроглию маркировали
антителами Iba-1 antibody (Rabbit polyclonal) и флуоресцентным красителем AlexaFluor 555, ядра –
красителем DAPI, на парафиновых срезах мозга (количество животных в группе-3) толщиной 5 мкм.
Визуализировали с помощью конфокального лазерного флуоресцентного микроскопа LSM880,
иммерсионного объектива 40х. Для обработки изображений использовали ImageJ и Phyton 3. В
соматосенсорной коре в области ишемического очага после часовой ОСМА наблюдалось снижение
количества микроглии противоспалительного фенотипа, которое увеличивалось в группе с введением
CdEPO. Изменения соотношения фенотипов микроглии в группе с введением CdEPO коррелировали с
улучшением функционального состояния животных после часовой ОСМА: восстанавливалась моторная
активность, снижался уровень стресса и сохранялась память животных. Проводимые исследования
регуляции соотношения фенотипов микроглии с помощью CdEPO позволяют рассматривать его как
перспективный нейропротектор, положительно влияющий на формирование ишемического очага и как
следствие восстановления рефлекторной деятельности и памяти животных в ранний постишемический
период.

Microglia is a unique example of immunocompetent cell in central nervous system that is capable of
protecting the brain from various damaging factors, including those that occur in case of ischemic injury. One of
microglia membrane’s receptors is common receptor subunit (β-cR), which in the presence of a ligand can form a
dimeric complex with erythropoietin. Carbamylated darbopoietin (CDEPO) (PHARMAPARK LLC, Moscow),
research of which has shown its neuroprotective properties, was used as an agonist for this receptor. The objective
of this work is to study the proportion of microglia phenotype after occlusion of the middle cerebral artery (OCMA)
after CdEPO injection.
One-hour exposure on C57BL/6 mice was proceeded by a 7-0 microfilament from Doccol Corporation and
under isoflurane anesthesia. CdЕPO was injected intravenously in 1, 3, 6, 12, 24, 48 hours after OCMA at 50
mkg/kg dose. Preservation of basic activity and memory was studied on the 10th postoperative day with Open Field
LE800S test and Shuttle Box LE916 (PanLab/Harvard Apparatus). The number of mice in the group is 10. Microglia
was marked with Iba-1 antibodies (Rabbit polyclonal) and secondary fluorescent antibody AlexaFluor 555. Nucleus
were marked by DAPI. Visualization was carried out by a ZEISS LSM 880 laser scanning confocal fluorescents
microscope with an 40x immersion objective and a yellow-green spectrum filter. Paraffin coronal sections of the
brain (5 μm thick) were studied (the number of mice in the group is 3). The images were processed using ImageJ
software and Python 3.
There was a decline in the number of anti-inflammatory microglia phenotypes in the somatosensory cortex on
the territory of ischemic focus after one-hour exposure, which increased in the group with CdEPO injection. Change
in microglia phenotypes proportion in the group with CdEPO injection correlated with improved functional state of
the animals after one-hour exposure: their motor activity restored, stress level decreased and their memory was preserved. The ongoing research on regulation of microglia phenotypes proportion with CdEPO allows considering
it as a promising neuroprotector giving a positive impact on the organism recovery in early post-ischemic period.